酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA)是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971年描述。該測(cè)定依賴于抗原-抗體相互作用的原理，并利用酶和比色檢測(cè)來(lái)量化目標(biāo)分子，主要用于檢測(cè)和量化生物樣品中特定蛋白質(zhì)、肽、抗體或抗原的存在。ELISA測(cè)定通常應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，包括臨床診斷、藥物研究和生命科學(xué)基礎(chǔ)研究。那么你知道ELISA實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題及解決方法嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！
 

　　一、高背景
 

　　原因：洗板不充分、Streptavidin-HRP 加樣量過(guò)高、孵育時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng)、樣本的交叉污染
 

　　解決方法：檢查洗板是否按要求進(jìn)行；洗板不充分；濃縮洗滌液有結(jié)晶就使用，導(dǎo)致洗滌不充分；檢查SA-HRP是否按要求的濃度配制；檢查孵育時(shí)間是否按要求進(jìn)行；注意實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能造成樣本交叉孔間反應(yīng)的操作。
 

　　二、無(wú)信號(hào)值
 

　　原因：試劑使用順序錯(cuò)誤、試劑配制錯(cuò)誤、試劑配制濃度錯(cuò)誤
 

　　解決方法：檢查試劑使用順序是否存在問(wèn)題，重復(fù)測(cè)試；檢查是否存在試劑配制錯(cuò)誤；檢查試劑是否因標(biāo)準(zhǔn)蛋白、抗體或SA-HRP濃度配制過(guò)低造成信號(hào)值無(wú)。
 

　　三、過(guò)強(qiáng)的信號(hào)值
 

　　原因：洗板不充分、TMB底物變質(zhì)、Streptavidin-HRP 加樣量過(guò)高
 

　　解決方法：
 

　　洗板不充分，造成SA-HRP殘留。檢查洗板是否按要求進(jìn)行；如使用洗板機(jī)，請(qǐng)充分沖洗管路并確保每個(gè)孔都被全部沖洗；TMB底物是否存在變藍(lán)，使用新的底物試劑；避免使用金屬物質(zhì)接觸底物造成變質(zhì)失效；檢查SA-HRP是否按要求的濃度配制；檢查加樣量是否按要求進(jìn)行。
 

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